96T人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA Kit

人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA KitHuman Crosslaps,Cr ELISA Kit人脫氧吡啶酚/脫

　　上海高創(chuàng)化學科技有限公司，是一家專注于生命科學和生物技術領域的高科技企業(yè)，是國內(nèi)代理銷售生物試劑、儀器的知名公司之一。公司本著為顧客服務、為科研服務的宗旨，為中國的專家和學者提供種類齊全的高品質產(chǎn)品。希美公司已與多家歐美著名生物技術公司簽訂獨家或區(qū)域代理協(xié)議，銷售的實驗儀器、消耗品、分子生化試劑、免疫試劑和細胞培養(yǎng)試劑等，已被廣泛應用于生命科學基礎研究、開發(fā)應用、制藥、疾病診斷與控制、人口與健康、生物技術等諸多領域。客戶遍布大學、研究所、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術公司和食品工業(yè)等單位。主要產(chǎn)品包括：英國Randox-lifesciences公司的藥物殘留ELISA試劑盒、抗體抗體蛋白;挪威Biosese公司的檢測表面活性劑、農(nóng)藥殘留、毒素、PCB等相關有害物質的ELISA檢測試劑盒以及魚類蛋白和抗體;Gibco公司DMEM培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基，MEM培養(yǎng)基、F10培養(yǎng)基等;Prospec-Tany公司的細胞因子、生長因子、蛋白激酶、重組和天然蛋白、酶以及病毒抗原和抗體;美國eBioscience公司的流式細胞術產(chǎn)品等。

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人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA Kit Human Crosslaps,Cr ELISA Kit
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人骨成型蛋白7(BMP-7)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用
 
預期應用
ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關液體中骨成型蛋白7(BMP-7)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中BMP-7水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入BMP-7抗原、生物素化的抗人BMP-7抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的BMP-7呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板：一塊(96孔)
2. 標準品(凍干品)：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2,000 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋2,000 pg/ml，1,000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62.5 pg/ml，31.2 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制1,000 pg/ml標準品：取0.5ml 2,000 pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A：1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100ul)，實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B：1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
標本的采集及保存
1.  細胞培養(yǎng)物上清：請離心后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。
2.  血清：標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

操作步驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標準品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul(取1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制)，37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100ul，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
注：
1. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
2. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。
3. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
4. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水
紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需
要，重復此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
特異性
    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人BMP-7，且與其它相關蛋白無交叉反應。
計算
  以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標)，OD值為縱坐標(普通坐標)，在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
2. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
3. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。
4. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
5. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
6. 底物請避光保存。
檢測范圍：
31.2 pg/ml – 2,000 pg/ml
說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且，洗滌不充分將影響試驗結果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。
7. 所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期：6個月

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