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人谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA kit

上海繼錦化學科技有限公司
會員指數(shù): 企業(yè)認證:         

價格:電議

所在地:上海

型號:

更新時間:2019-11-18

瀏覽次數(shù):1668

公司地址:上海市閔行區(qū)綠蓮路100弄45號

黃先生(先生) 經(jīng)理 

產(chǎn)品簡介

產(chǎn)品規(guī)格:96T試劑盒組成及試劑配制1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)2. 標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好

公司簡介


上海繼錦化學科技有限公司是一家集科研、開發(fā)、銷售為一體的高科技企業(yè)。公司主要經(jīng)營進出口化學試劑,生物醫(yī)學試劑,生命科學科研產(chǎn)品,實驗室設備、耗材等。為了更好的服務好每一位顧客,公司始終把產(chǎn)品品質和人力資源視為企業(yè)發(fā)展的原動力?!俺缟衅焚|,以人為本?!蔽覀儓詻Q抵制低劣、偽冒產(chǎn)品的不正當競爭。目前,公司擁有一支年輕、訓練有素的團隊,他們都具有化學相關專業(yè)本科以上學歷。我們的口號是:求真?務實?敬業(yè)?爭先。公司在注重產(chǎn)品品質和人才隊伍的同時也建立了一套技術支持、物流、售后服務等全方位服務體系。我們的目標是:快速穩(wěn)定的供應、無可挑剔的質量、全方位貼心的服務。
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產(chǎn)品說明

 

產(chǎn)品規(guī)格:96T

試劑盒組成及試劑配制

1.        酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2.        標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為1,600 pg/ml,將其稀釋為400 pg/ml后,再做系列倍比稀釋注:不要直接在板中進行倍比稀釋,分別稀釋成400 pg/ml,200 pg/ml,100 pg/ml,50 pg/ml25 pg/ml12.5 pg/ml,6.25 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制200 pg/ml標準品:取0.5ml 不要少于0.5ml 400 pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3.        樣品稀釋液1×20ml。
4.        檢測稀釋液A1×10ml。
5.        檢測稀釋液B1×10ml。
6.        檢測溶液A1×120μl1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(100μl/孔),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測溶液A990μl檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
7.        檢測溶液B1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8.        底物溶液1×10ml/瓶。
9.        濃洗滌液1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.    終止液1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11.    覆膜5
12.    使用說明書:1
 
自備物品
1.   酶標儀(建議參考儀器使用說明提前預熱)
2.   微量加液器及吸頭,EP
3.   蒸餾水或去離子水,全新濾紙
 
標本的采集及保存
1.        血清:全血標本請于室溫放置2小時或4過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20-80保存,但應避免反復凍融。
2.        血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20-80保存,但應避免反復凍融。
3.        其它生物標本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20-80保存,但應避免反復凍融。
4.        樣本處理:血清或血漿標本推薦稀釋5,000倍。
注:以上標本置4℃保存應小于1周,-20℃或-80℃均應密封保存,-20℃不應超過1個月,-80℃不應超過2個月;標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
 
操作步驟
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。
1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?/span>100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37反應60分鐘。
3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37反應60分鐘。
5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37避光顯色30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。
 
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2.  加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制:Detection ADetection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請精確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
 
洗板方法
1. 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。
2. 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
 
計算
 以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),OD值為橫坐標(對數(shù)坐標),在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,如curve expert 1.3,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
 

 

 

 

 


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