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人卵巢癌細(xì)胞系實驗過程

發(fā)布時間:2017-03-23瀏覽次數(shù):1191返回列表

 人卵巢癌細(xì)胞系實驗過程
1.人卵巢癌細(xì)胞系實驗所需的材料
1.1.CAOY3,使用%15的小牛血清L-15培養(yǎng)達(dá)到飽和濕度。二氧化碳含量為5%,溫度為37攝氏度的溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
1.2.保爾佳。國外某制藥廠生產(chǎn)。
1.3.卡鉑、甲氨喋吟以及5—FU都為市場銷售的針劑。
1.4.MTT,250毫克每瓶,使用生理鹽水將其配置成5毫克每毫升的溶液,存放在4攝氏度的環(huán)境下,且要避開陽光的照射。
1.5.二甲基亞砜,市場上銷售的分析純試劑。
1.6.酶聯(lián)免疫檢測儀。
1.7透射電子顯微鏡,采用日歷H-600型號。
2.人卵巢癌細(xì)胞系實驗實驗方法
2.1.藥物的抑制作用的測試。將處在指數(shù)增殖期的細(xì)胞消化,配成溶度是200000個每毫升的單細(xì)胞懸液,將96孔板加入進(jìn)去,每個加入細(xì)胞的懸液是0.1毫升,細(xì)胞的數(shù)量為20000個每孔。把96孔板放置在37攝氏度溫箱內(nèi)培養(yǎng)一天,當(dāng)細(xì)胞貼壁良好后,將每班設(shè)為對照組以及觀察組,觀察組每孔加入少量的含藥液的培養(yǎng)基0.1毫升,同樣,對照組加入相同量的培養(yǎng)基。根據(jù)公式C=(50×D)/5000×1000/50%,即可計算出要溶度(其中D為臨床常用的溶度,單位是mg/kg每天,C是體外常用的溶度,單位是拼ug/ml),使其藥物的溶度是C、10、C/10、C/100。把加入藥后的96孔板分為兩組后放置在37攝氏度的溫箱內(nèi),分別培養(yǎng)一天以及3天(一天24小時)。在培養(yǎng)快要結(jié)束的前4小時,將96孔板加入0.01毫升的MTT溶液。當(dāng)培養(yǎng)結(jié)束后,要將孔內(nèi)的液體去除,再每孔加入0.2毫升的DMSO,搖晃震蕩30分鐘,使用酶聯(lián)免疫檢測儀比色,測量出的波長是490納米,參考波長為450納米。根據(jù)公式(1-B/A)×100%(A、B分別是對照組以及觀察組的光密度值),即可計算出藥物的抑瘤率。此實驗應(yīng)該重復(fù)4次,采用F檢驗或者t檢驗進(jìn)行信息處理。
3.人卵巢癌細(xì)胞系增殖抑制作用的研究
據(jù)有關(guān)文件記載,上世紀(jì)八十年代末就對保爾佳的抗腫瘤作用進(jìn)行過報道,在此之后,越來越的多的報道顯示:保爾佳在治療惡性腫瘤中發(fā)揮的作用越來越顯著。不過,對于治療卵巢癌的相關(guān)報導(dǎo)卻很少,基礎(chǔ)性研究更是沒有。本文研究顯示:在24小時作用下,保爾佳對于人卵巢癌CAOV3細(xì)胞的增殖抑制作用和卡鉑等化療藥物相似,并沒有顯著的差異性可言。在3天時間的作用下,其保爾佳的抑制瘤腫效果明顯比5-FU更低,而和別的化療藥物沒有顯著的差異。這樣充分說明,保爾佳能夠作為一種抗擊腫瘤的藥物,單獨的使用于卵巢癌病人身上。該要沒有明顯的副作用,且可以提升機體的免疫能力。因此,更適用于不能接受普通治療的晚期患者。

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