兔核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA Kit

產品規(guī)格：96T試劑盒組成及試劑配制1. 酶聯(lián)板：一塊(96孔)2. 標準品(凍干品)：2瓶，每瓶

上海繼錦化學科技有限公司是一家集科研、開發(fā)、銷售為一體的高科技企業(yè)。公司主要經營進出口化學試劑，生物醫(yī)學試劑，生命科學科研產品，實驗室設備、耗材等。為了更好的服務好每一位顧客，公司始終把產品品質和人力資源視為企業(yè)發(fā)展的原動力。“崇尚品質，以人為本?！蔽覀儓詻Q抵制低劣、偽冒產品的不正當競爭。目前，公司擁有一支年輕、訓練有素的團隊，他們都具有化學相關專業(yè)本科以上學歷。我們的口號是：求真?務實?敬業(yè)?爭先。公司在注重產品品質和人才隊伍的同時也建立了一套技術支持、物流、售后服務等全方位服務體系。我們的目標是：快速穩(wěn)定的供應、無可挑剔的質量、全方位貼心的服務。

產品規(guī)格：96T

試劑盒組成及試劑配制

1.        酶聯(lián)板：一塊(96孔)2.        標準品(凍干品)：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為1,600 pg/ml，將其稀釋為400 pg/ml后，再做系列倍比稀釋(注：不要直接在板中進行倍比稀釋)，分別稀釋成400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。如配制200 pg/ml標準品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 400 pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。3.        樣品稀釋液：1×20ml。4.        檢測稀釋液A：1×10ml。5.        檢測稀釋液B：1×10ml。6.        檢測溶液A：1×120μl(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(100μl/孔)，實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測溶液A加990μl檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。7.        檢測溶液B：1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。8.        底物溶液：1×10ml/瓶。9.        濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10.    終止液：1×10ml/瓶(2N H₂SO4)。11.    覆膜：5張12.    使用說明書：1份 自備物品1.   酶標儀(建議參考儀器使用說明提前預熱)2.   微量加液器及吸頭，EP管3.   蒸餾水或去離子水，全新濾紙 標本的采集及保存1.        血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。2.        血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。3.        其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。4.        樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋5,000倍。注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。 操作步驟實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解)；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制)，酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。 注：1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。2.  加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。 洗板方法1. 手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。2. 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標)，OD值為橫坐標(對數(shù)坐標)，在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 

 

 

 

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