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手性柱使用時需要特別注意的一些問題
發(fā)布時間:2017-05-23瀏覽次數(shù):2339返回列表
本儀器一般都較為昂貴,使用不當(dāng)又易導(dǎo)致?lián)p壞,且再生尤其困難,所以使用、維護(hù)與保養(yǎng)均需特別慎重。本文主要介紹手性柱使用時需要特別注意的一些問題。
1、將色譜柱接到色譜儀器之前,必須先用合適的溶劑沖洗流路(包括六通閥和定量環(huán))。杜流路中殘存丙酮、氯仿、DMF(二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲基亞砜)、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF(四氫呋喃)等,以防止破壞手性固定相。如果在進(jìn)樣檢測,進(jìn)樣間隔的洗針液必須更換成合適的溶劑,是15%~20%的異丙醇溶液。然后連接好色譜柱,不接檢測器,用純水以0.5ml/min流速沖洗約20min。(注意:流速需小間隔從0升至0.5ml/min)
2、手性柱保存時,必需保證柱內(nèi)無緩沖鹽或其他鹽類物質(zhì)殘存。
3、樣品檢測前需仔細(xì)詢問送樣人員樣品中可能含有的溶劑,如果工藝中用到丙酮、氯仿、DMF、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF,則需盡量烘干。樣品盡量溶解在流動相中,并用0.45μm濾膜過濾。不能使用強(qiáng)堿性物質(zhì)作為流動相添加劑或者溶解樣品,因為這樣會損壞填料中的硅膠成分。
4、連接檢測器,再用純水以0.5ml/min流速沖洗約120min。
5、提倡在室溫下使用,但一般要求柱溫不超過25℃。
6、用15%以內(nèi)的異丙醇溶液以0.5ml/min流速沖洗約60min。
7、要特別注意流動相及樣品溶解溶液的pH值,佳pH范圍為4.0~7.0,切不可超過10.0,以防止硅膠溶解而損壞填料,所以pH不要超過8.0。否則,易導(dǎo)致手性分離不佳、色譜峰嚴(yán)重變寬、色譜峰拖尾及分叉等。強(qiáng)堿性溶液的導(dǎo)入,尤其容易導(dǎo)致手性柱不可逆損壞,無再生可能而徹底報廢!
8、再用純水以0.5ml/min流速沖洗約60min。
9、用流動相以不超過0.8ml/min流速平衡約1h直至基線平穩(wěn),進(jìn)樣檢測。
10、如果系統(tǒng)中或者色譜柱中含較高濃度的異丙醇或者乙醇時,由于他們的粘度比較大,平衡色譜柱時需特別注意壓力變化,可采用低流速平衡,當(dāng)柱壓下降后再逐漸升高至要求的流速。 (3)樣品檢測完畢,用無水乙醇清洗色譜柱,以0.5ml/min沖洗3個小時。用無水乙醇柱壓會比較高,所以流速不能過高,沖洗過程中注意壓力變化,如超過50bar,則把流速降至0.3ml/min,并適當(dāng)延長沖洗時間
注:手性柱在使用過多次且正常后,可將時間適當(dāng)縮短