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質控菌株及其保存與應用
發(fā)布時間:2021-04-06瀏覽次數(shù):931返回列表
一.菌種類型
(一)標準茵株
要搞好臨床微生物學檢驗質控,必須保存有一批標準菌株,作為對儀器、培養(yǎng)基、染色液、試劑和診斷血清的質控菌株,也可作為從事細菌檢驗的工作人員熟悉某些菌株的教具。
1.標準菌株的條件
(1)形態(tài)、生理、生化及血清學特性典型,并相當穩(wěn)定。
(2)菌株對所試藥物產生恒定的抑菌環(huán)和恰當?shù)腗IC 值。
(3)對測試項目反應敏感。如測試巧克力瓊脂平板的分離能力,應選流感嗜血桿菌或腦膜炎奈瑟菌。
2.標準菌株的來源
(1)ATCC:美國典型菌種保藏中心。
(2)NCTC:英國國家典型菌種保藏中心。
(3)(中國)國家菌種保藏中心。
(4)實驗室分離菌株:實驗室分離菌株必須經(jīng)過嚴格鑒定,其形態(tài)、生理、生化特征典型,經(jīng)多次傳代,特征恒定,否則不能作為標準菌株。
(二)臨床菌株
臨床分離的菌株,可保存幾天、幾星期或根據(jù)需要選擇一些菌株長期保存,以便進行統(tǒng)計、分析,或用于教學和研究。
二.菌種保存
保存菌種用的培養(yǎng)基必須能維持使微生物長期生存且不出現(xiàn)生長或新陳代謝過于旺盛的情況,菌株能較長時間存活且保持性狀穩(wěn)定。
1.菌種保存的注意事項
(1)不能用含有可發(fā)酵性糖的培養(yǎng)基保存菌種。
(2)不可以使用選擇性培養(yǎng)基,不能從藥敏試驗平板培養(yǎng)基上留取菌株。
(3)不可使培養(yǎng)菌干枯,所有試管要保持良好的密封性。
(4)對溫度變化敏感的細菌,如淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌,不可貯存于冰箱,但可用快速冷凍干燥法長期保存。
(5)作為抗菌藥物敏感試驗用的標準菌株,由保存狀態(tài)取出后,不能連續(xù)使用1 周以上,應定期傳代,但一般不超過6 次,必要時進行geng換。
2.菌種保存的方法
保存菌種的方法,應根據(jù)菌種的類型和保存目的進行選擇,一般包括以下幾種方法:
(1)培養(yǎng)基保存法:此法不需要特殊設備,并可隨時提供使用,為常用的一種保存方法,其缺點是易發(fā)生變異。營養(yǎng)要求不高的細菌,可用半固體保存法,一般2~3月轉種1次,并檢查菌株特性,如特性已改變,則需丟棄。特殊培養(yǎng)要求的細菌,如流感嗜血桿菌可接種巧克力瓊脂斜面,密封后冰箱貯存,每2周轉種1次。淋病奈瑟菌保存于巧克力瓊脂,每天或隔天轉種1 次,不宜4 ℃冰箱保存,因易死亡。
(2)快速冷凍法:將純培養(yǎng)細菌在液體培養(yǎng)基上增菌后,取數(shù)個新鮮菌落加入含小牛血清或脫纖維綿羊血的培養(yǎng)基內制成濃菌懸液,再放人無菌玻璃珠,將此瓶放入-30℃以下低溫冰箱保存。需要時用無菌鑷子取出1 粒玻璃珠置增菌培養(yǎng)液中,增菌培養(yǎng)后即可獲得新鮮菌種。用此方法,大部分細菌可保存6 ~12 月,甚至geng長時間。
(3)冷凍干燥法:是菌種保存蕞佳方法,可以免去細菌因頻繁傳代而造成菌種污染、變異和死亡。此法需冷凍干燥設備,操作較費時,但適用于需要長期保存的菌種。
三.菌種管理
(1)實驗室保存菌種需按規(guī)定時間轉種,每轉種3代作一次鑒定,并有詳細記錄卡,包括菌種名稱、編號、來源、保存日期、傳代情況等。
(2)實驗室保存菌株不得擅自處理或帶出實驗室,如確需要帶離實驗室,須經(jīng)上級領導批準,并做好詳細的記錄。
(3)菌種應有專人保管,如遇工作調動,應及時做好交接工作。