白細(xì)胞介素1是一種重要的細(xì)胞因子，主要由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，IL-1不僅對多種免疫活性細(xì)胞有重要的調(diào)節(jié)功能，而且與發(fā)熱、炎癥發(fā)生以及某些疾病的病理變化有關(guān)。目前對IL-1產(chǎn)生水平的檢測主要應(yīng)用生物學(xué)活性檢測的方法。

一、ConA刺激小鼠胸腺細(xì)胞檢測IL-1生物學(xué)活性
 
小鼠胸腺細(xì)胞在絲裂原刺激下表達(dá)IL-1受體，在有IL-1同時存在的條件下，IL-1可協(xié)同絲裂原促T細(xì)胞的增殖作用。根據(jù)加入IL-1后增殖水平（3H-TdR摻入率）的增加可計算出樣品中IL-1的活性單位，或計算出刺激指數(shù)。

二、應(yīng)用EL-4 CTLL檢測IL-1生物學(xué)活性
 
小鼠胸腺瘤細(xì)胞系EL4的某些亞克隆細(xì)胞表面具有高密度IL-1受體，在IL-1誘導(dǎo)下產(chǎn)生高水平的IL-2，通過用IL-2依賴株CTLL-2檢測IL-2的生物學(xué)活性，從而反映檢測樣品中IL-1的水平。

實驗材料：
ConA EL4細(xì)胞 CTLL-2細(xì)胞
試劑、試劑盒     
FCS RPMI1640 3H-TdR PPO POPOP 二甲苯
儀器、耗材     
濾紙 收集儀 計數(shù)儀 96孔板 吸管 滴管 試管 加樣器 CO2培養(yǎng)箱


實驗步驟：

一、ConA刺激小鼠胸腺細(xì)胞檢測IL-1生物學(xué)活性

1.  取6～8 周齡C57BL16小鼠，拉頸處死，無菌取胸腺置不銹鋼網(wǎng)篩上，用注射器針蕊研磨成細(xì)胞懸液調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1.5×107 /ml
                
2.  細(xì)胞懸液內(nèi)加入ConA，使終濃度為3 μg/ml，在96孔培養(yǎng)板中加100 μl（1.5×106細(xì)胞）
                  
3.  加入不同稀釋度待測樣品和IL-1標(biāo)準(zhǔn)品100 μl/孔（ConA終濃度為1.5 μg/ml），37 ℃  CO2孵箱 66 h
            
4.  每孔加3H-TdR 0.5 μci，37 ℃ CO2孵箱 6 h
        
5.  多頭細(xì)胞收集儀收獲于9999型玻璃纖維紙上
                  
6.  烤干，移入液閃瓶中，加適量閃爍液，于液閃儀上測β計數(shù)
 
7.  計算

（1）從IL-1標(biāo)準(zhǔn)曲線上測得IL-1的活性單位
  
（2）也可用刺激指數(shù)（SI）表示
 
  實驗組cpm
SI＝────── ×100％
     對照組cpm

二、應(yīng)用 EL-4 CTLL檢測IL-1生物學(xué)活性
 
1.  用EL4細(xì)胞兩步法檢測IL-1活性
        
（1）收集處于對數(shù)生長期的EL4細(xì)胞
               
（2）洗滌后，用1 ％FCS RPMI1640重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞濃度2×106 /ml
                
（3）加處96孔板中，100 μl/孔
               
（4）加入不同稀釋度的IL-1α或IL-1β，100 μl/孔，同時設(shè)1 ％FCS RPMI 1640對照
                
（5）5 ％CO2 37 ℃培養(yǎng)18～24 小時
               
（6）按終稀釋度為1∶10～20轉(zhuǎn)入另一塊96孔板中
                
（7）用CTLL-2 檢測IL-2活性、檢測方法見"IL-2檢測"

2.  用EL4細(xì)胞一步法檢測IL-1活性
        
（1）用5 ％FCS RPMI 1640調(diào)整EL4細(xì)胞濃度至2×105 /ml，CTTL-2濃度至4×105 /ml
 
（2）加入96孔板中，兩種細(xì)胞各加50 μl/孔
                   
（3）加入不同稀釋度的IL-1或待測樣品，同時設(shè)EL4和CTLL-2細(xì)胞對照    
              
（4）置5 ％CO2，37 ℃培養(yǎng)24～28 小時后加入3H-TdR，0.5 μci/50 μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)6～8 小時
                 
（5）收集樣品，β計數(shù)

注意事項 ：

一、ConA刺激小鼠胸腺細(xì)胞檢測IL-1生物學(xué)活性

1.  不同品系小鼠對IL-1的反應(yīng)性有差異，據(jù)資料報道以C57BL為好。
 
2.  不同周齡小鼠胸腺細(xì)胞對ConA反應(yīng)性不一，一般選用6～8 周齡，小于5 周或大于10 周齡小鼠胸腺細(xì)胞對ConA反應(yīng)不穩(wěn)定。
  
3.  ConA促絲裂原作用要進(jìn)行預(yù)試，一般采用亞適劑量。

二、應(yīng)用EL-4 CTLL檢測IL-1生物學(xué)活性
 
1.  在一步法檢測IL-1時，其EL4細(xì)胞濃度不宜超過1×104 /孔，血清終濃度應(yīng)＜5％。
  
2.  在二步法檢測IL-1時，其EL4細(xì)胞濃度在2×105 /孔時，轉(zhuǎn)移上清稀釋度不宜低于1∶8，其誘導(dǎo)時間應(yīng)12～24 小時間為佳。誘導(dǎo)血清濃度應(yīng)≤1％。
  
3.  在檢測經(jīng)誘導(dǎo)的上清中IL-1時，應(yīng)避免使用A23187，TPA和ConA等較強(qiáng)的能誘導(dǎo)EL4細(xì)胞產(chǎn)生IL-2的誘導(dǎo)劑來刺激IL-1的產(chǎn)生