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怎樣學(xué)會分離成纖維細(xì)胞?樊克新方法哦!
發(fā)布時間:2018-10-29瀏覽次數(shù):1497返回列表
成纖維細(xì)胞(又稱皮膚成纖維細(xì)胞)屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來源于人正常的皮膚組織,成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞,由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng),它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。
一般而言,成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和 III 型膠原等細(xì)胞外基質(zhì),并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。
傷口修復(fù)時,成纖維細(xì)胞由可增殖,可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的,可重塑基質(zhì)的表型,同時,它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對修復(fù)時的炎癥反應(yīng)。
- 先在分離成纖維細(xì)胞時要做到在無菌條件下進(jìn)行,打開生物安全柜紫外燈 30min 作無菌處理。
- 將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡 75% 酒精,消毒 2min,
- 將皮膚組織置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍,
- 然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等,
- 將皮膚剪成 0.5*0.5 cm 小塊,放入 dish 中,加 0.1% 的 dispase 溶液,封口膜封口,4℃ 冰箱過夜消化,
- 第二天,用鑷子將表皮與分開(薄的那層是表皮,厚的那層是),
- 將剪碎,移至離心管,用 0.1% 膠原 Ⅰ 型酶+0.1% 膠原Ⅱ型酶+0.1% 膠原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴鍋中消化至少 2 h(視消化程度而定),
- 用 100 μm 網(wǎng)篩過濾,
- 取濾液,300 g,離心5 min,
- 用完全培養(yǎng)基重懸沉淀,
- 鋪瓶,
- 隔天換液。