導(dǎo)讀:如果在基質(zhì)皮質(zhì)醇ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)顯色淡要怎么辦？問題出在哪里？今天的技術(shù)文章將主要針對(duì)Elisa顯色淡的原因及解決方案做一系列分析。下面一起來看看今天的分析內(nèi)容吧！
基質(zhì)皮質(zhì)醇ELISA試劑盒顯色淡的主要原因有哪些：
1.原因：試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高。
解決方案：盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫。
2.原因：試劑盒未充分平衡。
解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。
3.原因：培養(yǎng)箱溫度不足37℃。
解決方案：注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意。
4.原因：保溫時(shí)間不足。
解決方案：校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。
5.原因：洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加。
解決方案：按說明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)。
6.原因：移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔。
解決方案：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，一次性使用。
7.原因：蒸餾水水質(zhì)有問題。
解決方案：使用新鮮合格的蒸餾。
8.原因：底物作用時(shí)間不足。
解決方案：準(zhǔn)確定時(shí)。
注意：顯色一定要控制時(shí)間，根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時(shí)間過短，結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過長(zhǎng)，空白增高或者非特異性顯色增加。
基質(zhì)皮質(zhì)醇ELISA試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)
、標(biāo)準(zhǔn)曲線
1.定量方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個(gè)濃度組成，測(cè)定次數(shù)不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。
2.定性方法：工作濃度范圍通過陰性、臨界值濃度和陽性的樣品測(cè)定來確定，每個(gè)濃度重復(fù)不少于5次，濃度與響應(yīng)值之間應(yīng)有一定的關(guān)系。
第二、檢測(cè)限和定量限
1.檢測(cè)限：20份空白樣品測(cè)定均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差。
2.定量限：應(yīng)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線中低濃度點(diǎn)。對(duì)于定量方法，應(yīng)對(duì)該濃度樣品至少測(cè)定6次進(jìn)行驗(yàn)證，而不能通過外延法推斷。
第三、臨界值（cut-off值）的確定
對(duì)于有高殘留限量的藥物，檢測(cè)方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測(cè)定的均值減去1.64倍標(biāo)準(zhǔn)差，即95%置信限處。
對(duì)于禁用藥物，檢測(cè)方法的臨界值為定量限，該值應(yīng)達(dá)到公認(rèn)的指標(biāo)。
第四、度和準(zhǔn)確度
對(duì)于有高殘留限量的藥物，添加濃度為MRL及MRL上下各一個(gè)濃度；對(duì)于禁用藥物，添加濃度為定量限和2倍定量限，每個(gè)添加濃度至少測(cè)定5個(gè)平行樣，并至少進(jìn)行3批實(shí)驗(yàn)（不同檢測(cè)日期，不同標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同批次試劑盒）。
1.準(zhǔn)確度：回收率范圍大于40%或符合相應(yīng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
2.度：以變異系數(shù)表示。
批內(nèi)變異系數(shù)：每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25%，對(duì)于禁用藥物小于或等于30%.
批間變異系數(shù)：所有樣品之間的變異系數(shù)值小于或等于30%，對(duì)于禁用藥物小于或等于40%.
定性方法：陰性和陽性樣品各測(cè)定不少于50份，確定假陽性率和假陰性率。
第五、交叉反應(yīng)
試劑盒與待檢藥物類似物、代謝物或共同存在的藥物測(cè)定交叉反應(yīng)率。
第六、保存期
保存期通過保存條件的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果確定。
第七、復(fù)核試驗(yàn)
1.定量方法：檢測(cè)限、IC50以及至少兩個(gè)添加濃度的準(zhǔn)確度和度，并與理化方法（或與具代表性進(jìn)口試劑盒）比較。
2.定性方法：檢測(cè)限、假陽性率和假陰性率。