MB100 便攜式三聚氰胺檢測儀

簡單介紹

利用318C酶標(biāo)儀或MB100便攜式三聚氰胺檢測儀酶聯(lián)免疫吸附測定法用食品及飼料中三聚氰胺的定量測定。

便攜式三聚氰胺檢測儀的詳細介紹

檢測方法

MB100便攜式三聚氰胺檢測儀，利用酶聯(lián)免疫吸附測定法用食品及飼料中三聚氰胺的定量測定。

檢測原理

MB100便攜式三聚氰胺檢測儀，酶聯(lián)免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進行免疫測定。先將三聚氰胺酶標(biāo)記物，樣品萃取物及標(biāo)準(zhǔn)加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競爭結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。在用去離子水清洗結(jié)束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍色的物質(zhì)。孵育30分鐘后停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。 
實驗所需設(shè)備及材料

三聚氰胺檢測試劑盒(目前常用進口試劑有美國Abraxis公司和美國Beacon公司的)
318C酶標(biāo)儀一臺或MB100便攜式三聚氰胺檢測儀(配有450nm濾光片)
1－5ml可調(diào)移液器
100－1000ul可調(diào)移液器.
 20－200ul可調(diào)移液器.

蒸餾水或去離子水..
可吸取50ul的移液器及吸頭.
可吸取50ul和100ul的八道移液器及吸頭.
吸水紙或相當(dāng)?shù)奈牧?font face="Times New Roman">.
 450nm的酶標(biāo)儀.
計時器.
洗瓶 
混旋器.
 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.注意事項 
配套使用試劑，不要同其它公司的產(chǎn)品混用，不要將不同批次的產(chǎn)品混用。 
樣品稀釋或含有雜質(zhì)很可能對結(jié)果的準(zhǔn)確性有影響。 
不要使用過期的產(chǎn)品。 
使用之前將所有試劑回升至室溫，但不要放置超過24小時。 
三聚氰胺屬于有毒性的化學(xué)品，請小心處理。 
停止液是1N鹽酸，避免接觸皮膚。 
樣品制備(以美國Beacon試劑為例)
濕的寵物食品萃取方法(稀釋倍數(shù)：100) 
均質(zhì)樣品至布丁狀。 
稱取2g樣品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并劇烈振蕩。 
超聲萃取1分鐘。 
漩渦混合1分鐘，然后靜置5分鐘，使樣品分層。 
3000 g室溫離心5分鐘。 
用玻璃纖維濾紙過濾上清液，并將萃取液收集于一干凈試管中。 
用樣品稀釋液將濾液20倍稀釋(如：0.1mL濾液+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS) 
移取150 ul進行分析。 
注意：用此方法測定了8個添加有15ppm三聚氰胺的貓糧(非要求召回)，回收率范圍為75%-117%。 
本方法只可作為樣品篩選方法，不可作為終確認方法。 
小麥面筋蛋白萃取方法：(稀釋倍數(shù)：500) 
1.均質(zhì)或混勻小麥面筋蛋白樣品。 
2.稱取0.2g均質(zhì)好的樣品加入10mL酸化的60%甲醇/水溶液(1mL 1N HCl/ 100mL 60%甲醇/水)。 
3.漩渦混合并超聲萃取，使樣品溶解(確保樣品中沒有結(jié)塊)。 
4.用樣品稀釋液稀釋萃取液按照1:10比例。(0.5mL+4.5mL 10%MeOH/20 mM PBS)。 
5.10000轉(zhuǎn)/分離心上清液10分鐘。 
6.用G6玻璃纖維濾紙過濾上清液，并將萃取液收集于一干凈試管中。 
7.移取150 ul進行分析。 
注意：如果樣品中含有大量的添加物，需要加入更大量的萃取溶液，以保證萃取效率。 
操作人依據(jù)自己的判斷力，如果測試結(jié)果比較高，需要加入兩倍的萃取溶液(0.2/20mL)，進行二次測定。 
干的寵物食品萃取方法(稀釋倍數(shù)：200) 
1.質(zhì)器均質(zhì)干的寵物飼料樣品。 
2.稱取1g樣品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并劇烈振蕩。 
3.超聲萃取1分鐘。漩渦混合1分鐘，然后靜置5分鐘，使樣品分層。 
4.3000 g室溫離心5分鐘。 
5.用G6玻璃纖維濾紙過濾上清液，并將萃取液收集于一干凈試管中。 
6.用樣品稀釋液將濾液20倍稀釋(如：0.1mL濾液+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS) 
7.移取150 ul進行分析。 
免疫測定過程(注意:標(biāo)準(zhǔn)及樣品做平行試驗以增加準(zhǔn)確度) 
將所有試劑及樣品回升至室溫20-280C，但不要放置超過24小時。 
從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮 
吸取150ul標(biāo)準(zhǔn)、樣品到對應(yīng)微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。加入50ul三聚氰胺酶標(biāo)記溶液到每個小孔中。 
混合60秒，20-28攝氏度下孵育30分鐘。 
將微孔中的溶液倒入水槽中，用蒸餾水完全充滿微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板。 
在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干。 
每個微孔中加入100ul底物溶液。 
20-28攝氏度下，孵育30分鐘。 
每個微孔中加入100ul停止液。 
450nm下讀板。 
結(jié)果分析
MB100便攜式三聚氰胺檢測儀，半定量的結(jié)果是由樣品的吸光率與標(biāo)準(zhǔn)的吸光率的簡單對比而來判定:樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色淺則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度高,樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色深則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度低。 
定量分析需要繪制以標(biāo)準(zhǔn)樣的吸光率為X軸,以標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度的半對數(shù)為Y軸的曲線圖.依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣吸光率的點畫成一直線,如此樣品的光吸收率可在線上找到,與此相對應(yīng)的Y軸則為樣品的濃度,樣品光吸收率范圍應(yīng)比標(biāo)準(zhǔn)樣的底范圍高,比zui高范圍低,即可說明此樣品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。

 MB100便攜式三聚氰胺檢測儀操作步驟：

試劑盒大同小異；

１．將樣品用甲醇或水提取，離心
２．將試劑盒梅標(biāo)板室溫下回溫至少一個小時
３．提取液＼標(biāo)準(zhǔn)１５０微升，移入酶標(biāo)板井
４．加入ＨＲＰ５０微升
５．震動，反應(yīng)３０分鐘
６．倒掉反應(yīng)液，用清洗液沖洗４次，吸水紙吸水
７．加入色原底物１００微升，放置３０分鐘
８．加入終止液１００微升，
９．１５分鐘后４５０ｎｍ下比色
１０．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算三聚氰胺的濃度

試劑盒，酶標(biāo)儀４５０ｎｍ，１０００微升＼２００微升、５０微升移液槍和八道移液槍，吸水紙，槍頭等。

注意移液時間和避免交叉污染。每次要有標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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